哈希分光光度計采用基座和比色皿上樣雙檢測模式，是一款高再現性的全波長(cháng)分光光度計。適用于更寬濃度范圍的樣品檢測，操作簡(jiǎn)便，不僅可用于測量DNA，RNA純度、濃度，測量蛋白質(zhì)濃度，也可用于一般物質(zhì)分析中的吸光度檢測。它可以在紫外可見(jiàn)光區任意選擇不同波長(cháng)的光，物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(cháng)的光能量，相應地發(fā)生了分子振動(dòng)能級躍遷和電子能級躍遷的結果。
哈希分光光度計常用于定量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的更高吸收峰的吸收波長(cháng)260nm。每種核酸的分子構成不一，因此其換算系數不同。定量不同類(lèi)型的核酸，事先要選擇對應的系數。如：1OD的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經(jīng)過(guò)上述系數的換算，從而得出相應的樣品濃度。
影響哈希分光光度計讀數不穩定的根本原因應該有兩類(lèi)：一類(lèi)是能量降低，信噪比下降，這個(gè)可能性比較大；另一類(lèi)是信號接收和處理故障。
1、能量降低
?。?）比色皿
如果是在400nm以下波長(cháng)測量，需使用石英比色皿，假如使用普通玻璃比色皿會(huì )吸收大部分的紫外能量。還有比色皿一般有光面和毛面之分，毛面是手捏的，光面是對正光路的。
?。?）樣品架
檢查樣品架是否在正確的槽位上，光是否全部照在比色皿上。方法是把波長(cháng)設定到550nm左右，這時(shí)是比較明亮的黃綠色光，在樣品室內用個(gè)小紙片擋下就能看到光斑。這個(gè)方法也能檢測可見(jiàn)區的光源是否正常，濾光盤(pán)及波長(cháng)驅動(dòng)是否正常。
?。?）空白樣品
樣品室不放任何東西對空氣調零，看是否穩定。如果穩定的話(huà)，應該是空白樣品本身吸光度太高了。方法是先對空氣調零，然后把空白樣品放入光路中看讀數。如果讀數很大，例如接近3A，則不可用。
?。?）光源
先確認分析波長(cháng)值，一般紫外可見(jiàn)有2個(gè)光源，紫外區用氘燈，可見(jiàn)區用鎢燈，切換點(diǎn)一般在340nm。鎢燈光較為明亮刺眼，氘燈光偏青紫色。如果儀器后面有透光窗口可以直接看，如果沒(méi)有的話(huà)，需要打開(kāi)外殼，打開(kāi)燈室罩。光源都是用壽命的，能量變弱或干脆不亮了，要換燈。也有比較小的可能是光源供電電路故障，例如電源老化后可能導致無(wú)法正常點(diǎn)亮氘燈。
?。?）光路
看光路是否偏了，可以把波長(cháng)設定到550nm左右，觀(guān)察樣品室內有無(wú)黃綠色光線(xiàn)，光斑能否正確照在接收器窗口上。確認燈室內光源光斑是否正確照在單色器入狹縫上，確認光路中有無(wú)雜物擋住。確認單色器內反射鏡、透鏡、光柵、濾光片等是否發(fā)霉或積滿(mǎn)灰塵，這個(gè)需要廠(chǎng)家才能處理。
?。?）驅動(dòng)電路故障
例如濾光盤(pán)驅動(dòng)異常，導致濾光片用錯或者干脆光路被遮擋。一般廠(chǎng)家或專(zhuān)業(yè)人員處理。
2、信號接收和處理故障
接收器（例如光電池或者光電倍增管）、放大電路、AD轉換電路等都有可能。這類(lèi)問(wèn)題一般由廠(chǎng)家或專(zhuān)業(yè)人員處理，這里不詳細說(shuō)明了。
